BioximiaForYou

amylázy

Alfa-amyláza (diastáza, alfa-1,4-glukán-4-glukán-hydroláza) patrí do triedy hydroláz, ktoré katalyzujú hydrolýzu polysacharidov, vrátane škrobu a glykogénu, na dextríny a jednoduché di- a monosacharidy (maltóza, glukóza).

Amyláza v najväčších koncentráciách je v pankrease, resp. Slinných žľazách - vo forme pankreatických a slinných izoenzýmov. Za fyziologických podmienok pozostáva amyláza v sére zo 40% amylázy pankreasu a 60% amylázy zo slinných buniek. Použitím špecifických inhibítorov alebo separáciou elektroforézou je možné stanoviť pôvod enzýmu prítomného v plazme. Amyláza sa z plazmy odstraňuje obličkami a vylučuje sa močom. To vedie k väčšiemu množstvu informácií, ktoré určujú aktivitu alfa-amylázy v moči ako test hodnotiaci funkčný stav pankreasu. Rast aktivity amylázy má najväčší význam v diagnostike ochorení pankreasu.

Klinická a diagnostická hodnota:

Aktivita krvnej alfa-amylázy a moču sa počas dňa veľmi líši.

Hyperamalasémia - zvýšenie aktivity amylázy v krvnom sére.

Akútna pankreatitída - maximálne hodnoty sa vyskytujú v prvých 6 - 12 hodinách po nástupe príznakov ochorenia. Po tomto čase sa aktivita enzýmu znižuje, normalizuje sa za 2-5 dní. Ak aktivita pretrváva viac ako 5 dní, znamená to zvýšenie zápalu.

Ø Exacerbácia pri chronickej pankreatitíde

Ø Perforácia dvanástnikového vredu

Ø Obštrukcia čriev

Ø Akútna zápal slepého čreva

Ø Alkaloidy (morfín, heroín, kodeín)

Ø Otrava metanolom

Ø Veľké dávky etanolu (pre alkoholikov)

Hypoamylázia - zníženie aktivity amylázy v krvnom sére (prakticky nemá diagnostickú hodnotu).

Ø nekróza pankreasu

Infarkt myokardu

Hyperamalazúria - zvýšené vylučovanie amylázy v moči.

Akútna pankreatitída - zvýšenie aktivity enzýmu sa pozoruje počas prvých 24 hodín zápalu. Zvýšené vylučovanie enzýmu do moču pretrváva ďalších 7 až 10 dní napriek skutočnosti, že aktivita amylázy v krvi po 3–4 dňoch je normálna.

Rakovina pankreasu

Ø Perforácia dvanástnikového vredu

Ø Gallstoneova choroba

Ø Choroby slinných žliaz, parotitída, kamene v slinných kanálikoch

Hypoamyláza - zníženie uvoľňovania amylázy v moči.

➢ Ochorenie obličiek

• Ochorenie pečene

"Stanovenie aktivity alfa-amylázy v biologických tekutinách zjednotenou Karaveyovou metódou"

Princíp: pôsobením alfa-amylázy sa škrob hydrolyzuje za vzniku produktov, ktoré nedávajú farebnú reakciu s jódom. Intenzita poklesu farby komplexu jód-škrob za jednotku času je úmerná aktivite enzýmu.

Skúmaný materiál: čerstvé sérum, moč.

Súprava obsahuje:

Činidlo №1 - tlmivý roztok

Činidlo č. 2 - koncentrovaný substrát

Reagencia №3 - koncentrovaný roztok jódu

Činidlo č. 4 - roztok fluoridu draselného

Činidlo č. 5 - kyselina chlorovodíková

Príprava činidiel pre postup analýzy:

Pracovný roztok substrátu: miešajte reagencie č. 1 a č. 2 v pomere 24: 1.

Pracovný roztok jódu: premiešajte destilovanú vodu, činidlo č. 3 a činidlo č. 4 v pomere 7: 1: 2.

Pracovný roztok kyseliny chlorovodíkovej: obsah fľaštičky číslo 5 sa zriedi 16-krát destilovanou vodou.

Priebeh určenia:

činidlo

Skúsená vzorka

Kontrolná vzorka

BioXplorer

amylázy

α-Amyláza [a - (1,4) -glukan-4-glukanohydroláza, KF 3.2.1.1] je enzým, ktorý hydrolyzuje vnútorné 1,4-α-glykozidické väzby škrobu, glykogénu a iných polymérov glukózy. Hlavným zdrojom α-amylázy u ľudí sú pankreas a slinné žľazy. Početné izoformy izolované z biologických tekutín a ľudských tkanív sú pravdepodobne heterogénne produkty posttranslačných zmien dvoch rodín izoenzýmov amylázy, ktorých syntéza je kódovaná dvoma lokusmi génu Atu-1, slinným (C) amylázovým typom a Atu-2, pankreatickým (P) typ enzýmu, úzko príbuzný v chromozóme 1. Izoenzýmy C a P nemajú veľké rozdiely v zložení aminokyselín. Dve izoformy sa izolovali gélovou filtráciou na Sephadexe v frakcii C-amylázy, z ktorých jedna obsahuje sacharidy. Molekulová hmotnosť izoforiem obsahujúcich sacharidy, 57 kDa, bez sacharidov - 55 kDa. Izoelektrické body hlavných izoforiem C-izoamyláz od 5,5 do 6,5. P-skupina izoamylázy má nižšiu molekulovú hmotnosť (53 kDa) a neobsahuje sacharidy. Izoelektrické body týchto proteínov sa pohybujú od 5,7 do 7,0.

Presvedčivý dôkaz, že amyláza typu P je tvorená len v pankrease, je absencia tohto izoenzýmu u jedincov s totálnou pankreatektómiou. Izoenzým a-amylázy C sa naproti tomu môže syntetizovať v rôznych orgánoch a tkanivách. Vysoká aktivita C-amylázy je fixovaná v tkanive vajíčkovodov a obsah ovariálnej cysty. Špecifická skupina izoamyláz produkovaná tkanivami ženských pohlavných orgánov nie je detegovaná v sére alebo v moči zdravých ľudí; distribúcia izoamyláz je u mužov a žien identická. Isoamylázy patriace do skupiny C sa tiež nachádzajú v ľudskom mlieku a tekutine rany.

Klinický význam stanovenia aktivity amylázy v sére.

Stanovenie aktivity a-amylázy v sére je najbežnejším testom na diagnostiku akútnej pankreatitídy. Pri akútnej pankreatitíde sa aktivita enzýmu v sére zvyšuje 3 - 12 hodín po bolestivom záchvate, dosahuje maximum po 20 - 30 hodinách a vracia sa do normálu s priaznivým priebehom do štyroch dní. Aktivita α-amylázy (diastáza) v moči sa zvyšuje 6 - 10 hodín po zvýšení aktivity v sére a vracia sa do normálu, najčastejšie tri dni po vzostupe.

V súčasnosti je všeobecne známe, že zvýšenie celkovej aktivity a-amylázy nie je špecifické pre pankreatitídu a iné ochorenia pankreasu. Klinické štúdie ukázali, že zvýšenie aktivity a-amylázy sa vyskytuje pri mnohých ochoreniach, medzi ktoré patrí črevná obštrukcia, ochorenia žlčových ciest, zápal slepého čreva, parotitída a mimomaternicové tehotenstvo. Citlivosť a špecifickosť stanovenia a-amylázy v diagnostike akútnej pankreatitídy sa zvyšuje so zmenami hraníc normálnych hodnôt (diskriminačná úroveň normy a patológie je aktivita 1,5 - 2 krát vyššia ako horná hranica normy). V tomto prípade je stanovenie aktivity a-amylázy najviac informatívne prvý deň vývoja akútnej pankreatitídy. Podľa niektorých autorov nemá stanovenie aktivity a-amylázy v sére pri chronickej pankreatitíde diagnostickú hodnotu.

U ľudí, a-amyláza, ktorá voľne prechádza cez filtračnú bariéru obličkových telies, reabsorbuje epitelové bunky renálnych tubulov rovnakým spôsobom ako iné nízkomolekulárne sérové ​​proteíny. Zvýšenie aktivity amylázy v sére môže byť spôsobené zníženou elimináciou enzýmu. Príkladom je stav nazývaný makroamylasémia, keď sa enzým viaže na sérové ​​imunoglobulíny a vytvára makromolekulárny komplex. Takýto komplex nie je filtrovaný do moču a nemôže byť odstránený inými mechanizmami, čo vedie k významnému a niekedy predĺženému zvýšeniu aktivity a-amylázy v krvnom sére. Makroamylazémia sa vyskytuje u zdravých ľudí s frekvenciou 1% u jedincov s hyperamylasémiou s frekvenciou 2,5%. Makroamylasémia môže byť diagnostikovaná metódou ultracentrifugácie, EF, gélovou chromatografiou, jednoduchým testom zrážania komplexu s polyetylénglykolom.

Sérová aktivita a-amylázy sa často zvyšuje pri zlyhaní obličiek, ale nie je úplne jasné, čo spôsobuje tento nárast - zvýšenie tvorby enzýmu alebo zníženie jeho eliminácie. V takýchto prípadoch sa môžu poskytnúť ďalšie informácie stanovením miery vylučovania α-amylázy alebo výpočtu klírensu enzýmu.

Podľa mnohých autorov je najcitlivejším a špecifickým testom diagnózy pankreatitídy úroveň aktivity P-izoenzýmu α-amylázy. Tento test má zvláštny význam, ak sa u pacienta s predpokladanou diagnózou pankreatitídy zistí normálna celková aktivita amylázy. Znížením aktivity P-amylázy je možné diagnostikovať chronickú pankreatitídu. Podiel P-izoamylázy na celkovej aktivite α-amylázy je významne vyšší v moči ako v sére, pravdepodobne v dôsledku rozdielov vo vylučovaní izoenzýmov obličkami. Diagnostická hodnota stanovenia aktivity izoenzýmov a-amylázy v moči je však nižšia ako v krvi.

Experiment - základná metóda vedy
Pozorovanie aj meranie sú zahrnuté v takejto komplexnej základnej metóde vedy ako experiment. Na rozdiel od pozorovania je experiment charakterizovaný zásahom výskumného pracovníka do pozície študovaných predmetov, aktívnym ovplyvňovaním predmetu.

Pôda je jedinečnou zložkou biosféry
Koncom 19. storočia. V. Dokuchaev, veľký ruský prírodovedec, svojimi štúdiami chernozem a iných pôd ruského údolia a Kaukazu zistil, že pôdy sú prirodzenými orgánmi v ich vonkajších znakoch a vlastnostiach síl.

Analýza moču
Analýza moču je séria chemických a fyzikálnych testov, ktorých výsledky ukazujú špecifickú hmotnosť a pH vzorky a prítomnosť a hladinu krvi, glukózy a ďalších zložiek vo vzorke. Vzhľadom k tomu, základné údaje o chronickom zlyhaní obličiek a dostávajú.

amylázy

α - Amyláza (diastáza, 1,4 - a - D - glukánová hydroláza, EC 3.2.1.1.) katalyzuje hydrolýzu a - 1,4 - glukozidových väzieb škrobu, glykogénu a ich príbuzných polysacharidov na maltózu, dextríny a iné polyméry. Molekulová hmotnosť enzýmu je asi 48 000 D. Molekula obsahuje atóm vápnika, ktorý nielenže aktivuje enzým, ale ho tiež chráni pred účinkom proteáz a aktivita amylázy sa zvyšuje s vplyvom iónov chlóru. V krvi predstavujú dva izoenzýmy: pankreatický - P-typ a slinný - S-typ, z ktorých každý je rozdelený do niekoľkých frakcií. Izoenzým S-typu je vo všeobecnosti 45 - 70% (v priemere 57%), zvyšok je v type P. Oba izoenzýmy majú takmer identické katalytické a imunologické vlastnosti, mierne sa líšia v elektroforetickej mobilite, ale sú dobre separované gélovou filtráciou na DEAE - Sephadex. K dispozícii je tiež makroamyláza, ktorá sa nevylučuje obličkami, ale môže sa nájsť v normálnom krvnom sére (približne 1% zdravých ľudí) a patológii (2,5%).

Vysoká aktivita amylázy sa pozoruje v príušnej a pankrease. Jeho aktivita, aj keď oveľa nižšia, sa však nachádza v tenkom a hrubom čreve, kostrových svaloch, pečeni, obličkách, pľúcach, vajcovodoch, tukovom tkanive. V krvi je enzým spojený s plazmatickými proteínmi aj s tvorenými prvkami. Aktivita enzýmu je rovnaká pre mužov a ženy a nezávisí od povahy prijatej potravy a dennej doby.

Existujúce metódy skúmania aktivity a-amylázy v biologických tekutinách sú rozdelené do dvoch veľkých skupín:

1. Sacharizujúce (reduktometrické) založené na výskume cukrov vytvorených zo škrobu redukčným účinkom glukózy a maltózy.

2. Amyloclastic, založený na stanovení zvyšku nerozštiepeného škrobu: t

• podľa stupňa intenzity jeho reakcie s jódom. Tieto metódy sú citlivejšie a špecifické, ale ich presnosť do značnej miery závisí od kvality škrobu a optimalizácie podmienok stanovenia.
• viskozitnú suspenziu škrobu, nemajú vysokú presnosť a nepoužívajú sa teraz.

3. Metódy využívajúce chromogénne substráty –– sú založené na použití komplexov substrát - farbivo, ktoré sa pôsobením a - amylázy rozpadajú za vzniku vo vode rozpustného farbiva.

4. Metódy založené na spojených enzymatických reakciách: t

Škrob + H₂O Maltose + Maltotriose + Dextrín

Maltose + N₂Asi 2 glukózy

Glukóza + ATP glukóza - 6 - F + ATP

Glukóza-6-F + NADF Glukonát-6-F + NADFN

Aktivita enzýmu je určená rýchlosťou akumulácie NADPH.

Dve amyloclastické metódy boli schválené ako jednotné: Karavey (s rezistentným škrobovým substrátom) a Smith-Rohe.

Stanovenie amylázovej aktivity s farbením
podklad pre náborovú spoločnosť "Lachema"

zásada

α-Amyláza katalyzuje hydrolýzu nerozpustného farebného škrobového substrátu za vzniku modrého vo vode rozpustného farbiva. Množstvo uvoľneného farbiva je úmerné katalytickej aktivite enzýmu.

Stanovenie aktivity alfa-amylázy.

Alfa-amyláza (diastáza) je enzým, ktorý vykonáva hydrolytické štiepenie polysacharidov na dextríny, maltózu a glukózu. Konečné produkty amylázy nedávajú farebnú reakciu s jódom. Pankreatické a slinné žľazy sú najbohatšie v amyláze. Amyláza sa vylučuje do krvi hlavne z týchto orgánov.

Ľudská krvná plazma obsahuje hlavne dva typy amylázy: pankreatickú a slinnú, tretí typ amylázy je veľký alebo makroamyláza. U moču sa prevažne vylučuje pankreatická amyláza, čo je jeden z dôvodov, prečo je stanovenie amylázy v moči informatívnejšie ako v krvi na stanovenie funkčného stavu pankreasu. Predpokladá sa, že 65% aktivity amylázy v moči je spôsobené amylázou pankreasu, zatiaľ čo 60% amylolytickej aktivity v sére je poskytovaná amylázou slinných žliaz. Pri akútnej pankreatitíde sa pankreatická amyláza zvyšuje v sére na 89% av moči na 92% bez zmeny indexov slinnej amylázy.

Aktivita amylázy v krvi a moči podlieha významným zmenám počas celého dňa, ako aj individuálnym rozdielom. Fluktuácie aktivity amylázy si vyžadujú jej štúdium v ​​dennom moči na posúdenie funkcie pankreasu.

Existujúce metódy na stanovenie aktivity a-amylázy sú rozdelené do dvoch skupín:

Metóda koncového bodu je založená na stanovení rezíduí nestráveného škrobu podľa stupňa intenzity jeho reakcie s jódom (Karaveyho metóda).

2. Kinetická metóda.

sérová α-amyláza - 16-30 g / h * l

a-amyláza v moči - 28-160 g / h * l

1. Sérum by nemalo byť hemolyzované.

2. Podmienky experimentu sú veľmi dôležité, najmä presný čas inkubácie 5 minút, preto sa neodporúča uskutočňovať simultánne štúdie s viac ako 5 sérami.

3. Stanovenie aktivity α-amylázy v moči sa vykonáva podobne ako stanovenie v krvi, v prípade hyperamylázy sa však odporúča zriediť moč s následným prepočítaním.

4. Aktivitu α-amylázy ovplyvňujú lieky - antibiotiká, lieky proti bolesti a tiež alkohol.

Zvýšenie aktivity amylázy sa vyskytuje hlavne pri ochoreniach pankreasu.

Pri akútnej pankreatitíde sa aktivita enzýmu v krvi a moči zvyšuje viac ako 10-krát. Hyperamalazémia sa objavuje bezprostredne po nástupe ochorenia, dosahuje maximum do 12-24 hodín, po čom enzýmová aktivita rýchlo klesá a normalizuje sa 2-6 dní. Typicky hypramilazúria trvá dlhšie ako zvýšenie aktivity enzýmu v sére, preto je 2-3 dni po bolestivom útoku viac informatívne určiť aktivitu a-amylázy v moči.

Pri chronickej pankreatitíde, rakovine pankreasu nie je zvýšenie aktivity enzýmu také významné. Okrem toho môže dôjsť k miernemu zvýšeniu aktivity enzýmu pri ochoreniach sprevádzaných podobným klinickým obrazom akútnej pankreatitídy: akútna apendicitída, peritonitída, perforovaný žalúdočný vred atď.

Preto výrazná amyláémia umožňuje rozlišovať akútnu pankreatitídu od chronických ochorení pankreasu, ako aj od iných akútnych ochorení brušnej dutiny.

Takmer vždy je amylazémia sprevádzaná amylazúriou. Stanovenie aktivity amylázy v moči je však menej presným diagnostickým ukazovateľom, pretože uvoľňovanie amylázy v moči je spojené s funkciou obličiek. Mierny vzostup amylázy v krvi pri súčasnom znížení jej hladiny v moči možno vysvetliť porušením renálnej vylučovacej funkcie.

Zníženie aktivity amylázy sa pozoruje pri nekróze pankreasu, ochoreniach pečene (hepatitída, cirhóza), rozsiahlych popáleninách, diabetes mellitus, kachexii atď.

194.48.155.252 © studopedia.ru nie je autorom materiálov, ktoré sú zverejnené. Ale poskytuje možnosť bezplatného použitia. Existuje porušenie autorských práv? Napíšte nám Kontaktujte nás.

Zakázať adBlock!
a obnoviť stránku (F5)
veľmi potrebné

Stanovenie amylázy v biologických tekutinách

Amyláza v krvi a úroveň tohto indikátora je normálna

• Čo je to enzým
• Spôsoby stanovenia
• norma
• Dôvody zvýšenia
• low čítanie

Jednou z dôležitých zložiek biochemickej analýzy krvi je štúdium jej enzymatickej aktivity. To určuje plazmatickú koncentráciu rôznych enzýmov, ktoré sú produkované hlavne určitými orgánmi. Tento typ špecificity umožňuje ich použitie ako diagnostické kritériá pre úzky rozsah chorôb. V tomto článku sa budeme zaoberať takýmto ukazovateľom, ako je rýchlosť amylázy, ktorá sa vzťahuje na špecifické markery patológie pankreasu.

Čo je to enzým

Po mnoho rokov, neúspešne zápasí s hypertenziou?

Vedúci ústavu: „Budete prekvapení, aké ľahké je liečiť hypertenziu tým, že ju užívate každý deň.

Alfa-amyláza sa považuje za jeden z enzýmov pankreatickej šťavy (pankreasu), ktorý sa aktívne podieľa na tráviacom procese. Je produkovaný exokrinnými bunkami a cez vylučovacie kanály vstupuje do dvanástnika, kde je zodpovedný za rozdelenie komplexných sacharidových zložiek na jednoduchšie. Podieľajú sa na rozklade glykogénu a škrobu. Konečným výsledkom ich pôsobenia by mala byť produkcia jednoduchej glukózy, ktorú telo spotrebuje na splácanie energetických potrieb buniek.

Ale amyláza by mala prúdiť výlučne do črevného lúmenu. Za normálnych okolností malé množstvo vstúpi do systémového obehu, pretože každá bunka v procese vitálnej aktivity má priamy kontakt s krvou. Pokiaľ nie je porušená integrita buniek pankreasu, koncentrácia enzýmu neprekračuje normálne limity. Krvná amyláza vďaka svojej vysokej enzymatickej aktivite, ktorá ovplyvňuje akékoľvek tkanivo tela, môže spôsobiť ich deštrukciu. Preto by sa jeho množstvo malo udržiavať na konštantnej úrovni.

Na liečbu hypertenzie, naši čitatelia úspešne používať ReCardio. Vzhľadom na popularitu tohto nástroja sme sa rozhodli ponúknuť ho vašej pozornosti.
Prečítajte si viac...

Metódy a testy na stanovenie aktivity amylázy v krvi

Amyláza v krvi cirkuluje týmto spôsobom: enzým je vylučovaný glandulárnymi pankreatickými bunkami, vstupuje do krvi a prenáša sa na všetky cievy. V pečeni je čiastočne neutralizovaný. Tá časť enzýmu, ktorá nemá čas na kolaps, prechádza cez renálny filter, kde sa koncentruje a vylučuje močom. Tento mechanizmus je základom pre stanovenie koncentrácie alfa-amylázy v rôznych biologických tekutinách.

Medzi hlavné analýzy patria:

• Biochemická analýza na stanovenie krvnej alfa-amylázy;
• Biochemická analýza moču na stanovenie amylázy v moči (analýza diastázy).

V klinickej praxi sa často používa druhá metóda, pretože je technicky oveľa jednoduchšie vykonávať a nevyžaduje odber krvi. Okrem toho je citlivejšia a špecifickejšia. V stabilne veľkom objeme krvi a extracelulárnej tekutiny je enzým v zriedenejšom stave ako v malom množstve moču. Aktivita amylázy v moči je preto niekoľkonásobne vyššia ako aktivita krvnej plazmy.

Normálny výkon

Pri hodnotení výsledkov analýzy by sa mali porovnať s určitými normami. Je dôležité si uvedomiť, že norma predpokladá hodnotenie v určitých jednotkách. Preto nezabudnite venovať pozornosť tým znakom, ktoré sú uvedené za číslami v stĺpci výsledkov analýzy. Okrem toho sa môže rýchlosť amylázy stanovená v rôznych laboratóriách líšiť v dôsledku použitia činidiel rôznej citlivosti. Zvyčajne je táto rýchlosť indikovaná laboratóriom vedľa výsledku.

Všeobecne akceptované štandardné ukazovatele diastázy a alfa-amylázy v tabuľke.

Biochémia, ktorá určuje aktivitu amylázy v krvi, sa vyznačuje tým, že miera amylázy u žien a mužov je identická. Pohlavné hormóny nemajú významný vplyv na tento enzým.

Príčiny a mechanizmy na zvýšenie ukazovateľa

Správna interpretácia výsledkov analýz na určenie koncentrácie amylázy v plazme alebo v moči môže skutočne pomôcť pri diagnostike mnohých ochorení. V klinickej praxi sa najčastejšie vyskytujú situácie, keď je amyláza alebo diastáza zvýšená. To ukazuje, čo vzniklo:

• Zvýšená sekrečná aktivita pankreasu;
• Prítomnosť prekážok v kanáli pankreasu alebo ich kompresia, čo komplikuje odtok šťavy pankreasu obsahujúcej amylázu;
• Postihnutie pankreatického tkaniva je traumatický, zápalový, nekrotický (deštruktívny) alebo neoplastický proces.

Zvýšenie krvnej alfa-amylázy a diastázy v moči sa preto vzťahuje na špecifické markery pre takéto ochorenia pankreasu a jeho kanálikov:

1. S exacerbáciou chronickej pankreatitídy;
2. S akútnou pankreatitídou, fokálnou nekrózou pankreasu (samodestrukcia tkaniva žľazy enzýmami), infiltráciou peripankreatu alebo v počiatočných štádiách závažnej nekrózy pankreasu;
3. Rakovina pankreasu. Rýchlosť amylázy sa prekročí vo väčšom rozsahu, keď sa nádor nachádza v hlave a tele orgánu;
4. Rôzne typy cholelitiázy s choledocholitiázou (migrácia kameňov do žlčových ciest);
5. Porážka veľkej dvanástnikovej bradavky dvanástnika vo forme stenotickej papilitídy, zaklinených kameňov a rakovinových nádorov.

Zvýšená aktivita amylázy pri iných ochoreniach a stavoch

Niekedy musíte čeliť situáciám, kde nie sú žiadne zjavné problémy s pankreasom, ale ukazovatele alfa-amylázy a diastázy presahujú normálny rozsah. To znamená, že existujú:

• Chyby v strave;
• Používanie alkoholických nápojov;
• Exacerbácia chronickej cholecystitídy a zápalového procesu v pečeni;
• Mimomaternicové tehotenstvo;
• Zápalové-deštruktívne ochorenia brušných orgánov (perforovaný vred, zápal slepého čreva, peritonitída, črevná obštrukcia a iné);
• Vírusové infekcie sprevádzané polyglandulitídou (viacnásobné zápalové zmeny takmer vo všetkých slinných a pankreatických ochoreniach). Stáva sa to parotitídou, cytomegáliou a vírusom Epstein-Barrovej.

low čítanie

Zriedkavo sa vyžaduje dešifrovanie testov, ktorých výsledky zaznamenali pokles aktivity amylázy v krvi. Ale aj tak to niekedy musíte čeliť. Toto je možné pomocou:

• Úplná alebo takmer úplná deštrukcia pankreasu v dôsledku nekrózy pankreasu;
• Rakovinová transformácia väčšiny pankreasu, v ktorej prakticky nie sú žiadne normálne bunky so zachovanými funkčnými schopnosťami;
• Odstránenie celej alebo subtotálnej resekcie pankreasu;
• Genetické poruchy aktivity enzýmu v tele (cystická fibróza).

Hladina amylázy v krvi a močovej diastáze je spoľahlivou vlajkovou loďou, ktorá indikuje smer diagnostickej cesty pre ochorenia pankreasu. Správne vyhodnotenie testov v kombinácii s porovnaním výsledkov iných typov výskumu ponecháva malú šancu na to, že mnohé choroby zostanú bez povšimnutia.

Klinická a diagnostická hodnota stanovenia aktivity alfa-amylázy

V krvi a moči

Aktivita krvnej alfa-amylázy a moču počas dňa (rovnako ako z jedného dňa na druhý) sa výrazne líši. Okrem toho boli u jedincov bez patológie tráviacich orgánov pozorované významné individuálne rozdiely týchto indikátorov. Vzhľadom na kolísanie vylučovania alfa-amylázy v moči sa odporúča preskúmať aktivitu enzýmu v moči odobratej denne.

Zmeny aktivity alfa-amylázy v krvi a moči sa vyskytujú počas tehotenstva. Hyperamylazémia. Aktivita alfa-amylázy sa významne zvyšuje pri ochoreniach pankreasu. Pri akútnej pankreatitíde sa aktivita enzýmu v krvi a moči zvyšuje 10-40 krát. Hyper-amylasémia sa vyskytuje pri nástupe ochorenia, dosahuje maximálne 12-24 hodín po vývinu, potom rýchlo klesá a dosahuje normálnu hodnotu 2-6 dní.

Aktivita enzýmu sa môže zvýšiť pri mnohých ochoreniach, ktoré majú podobný klinický obraz s akútnou pankreatitídou, konkrétne: akútnou apendicitídou, peritonitídou a perforovaným žalúdočným a dvanástnikovým vredom. U pacientov s peritonitídou je zvýšenie aktivity amylázy dôsledkom vývoja baktérií tvoriacich amylázu. Zvyčajne sa aktivita enzýmu pri týchto patologických stavoch zvyšuje 3-5 krát.

Ochorenia, ktoré spôsobujú relatívne malú hyperamyláziu nepankreatického pôvodu (t.j. bez priameho ovplyvňovania samotnej pankreasu), zahŕňajú cholecystitídu, cholelitiázu, stav spojený s ruptúrou žlčníka, ochorením obličiek, zlyhaním obličiek, metastázou rakovinového nádoru v pľúcach a poškodením slinných žliaz. s obturáciou ich kanálov (jasný klinický obraz parotitídy je možné ľahko vysvetliť hyperamyláziu), prostatitis, traumatické poranenie mozgu, traumatický šok, popáleniny, pneumónia, diabetická ketoacidóza, potrat, pooperačné obdobie.

Aktivita alfa-amylázy v sére sa tiež zvyšuje s perforáciou pažeráka, žalúdočným vredom, gastritídou, akútnou črevnou obštrukciou, ischémiou a infarktom tenkého čreva, peritonitídou, ruptúrou trubice počas mimomaternicového tehotenstva, salpingitídy, aneuryzmy aorty.

Hlavnými príčinami hyperamylasémie sú: zhoršený výtok sekrécie zo žliaz (producenti alfa-amylázy), zvýšená permeabilita histohematogénnej bariéry v žľazách, nekróza tkanív, zhoršené uvoľňovanie enzýmov cez renálny filter.

Niektoré iné hormóny a mnohé farmakologické liečivá, hlavne látky, ktoré vedú k redukcii Oddiho zvierača, spôsobujú adrenalín: adrenalín, histamín, sekretín, furosemid, salicyláty, antikoagulanciá, morfín, pantopon, ópium, kodeín, tetracyklín a tiež alkohol.

Napriek tomu, že hyperamylasémia je takmer vždy sprevádzaná peramylazúriou, stanovenie aktivity alfa-amylázy v moči nemusí byť vždy presným diagnostickým indikátorom, pretože uvoľňovanie amylázy do moču je spojené s funkciou obličiek. Okrem toho obličky vylučujú z krvi len 24% amylázy vylučovanej tráviacimi žľazami.

Štúdia aktivity alfa-amylázy v dennom moči je spoľahlivejším biochemickým testom na detekciu ochorenia pankreasu, ako je štúdia založená na analýze jednej časti. Po aktivite krvnej alfa-amylázy po návrate do normálneho stavu pankreatitídy môže zostať zvýšená v moči až na 7 dní.

Koeficient "aktivita alfa-amylázy v krvi / aktivita alfa-amylázy v moči" je indikátorom funkčnej užitočnosti renálneho filtra.

Hypoamylamín v klinickej praxi je zriedkavý. Pozoruje sa u pacientov s ochoreniami pečene (hepatitída, cirhóza), malígnych nádorov (najmä v prítomnosti metastáz v pečeni), rozsiahlych popálenín, kože, cukrovky, hypotyreózy, bežných porúch príjmu potravy, úbytku hmotnosti, kachexie a tiež pod vplyvom intoxikácie ( napríklad v prípade toxikózy u tehotných žien). Zníženie aktivity alfa-amylázy najčastejšie indikuje nedostatočnosť exokrinnej funkcie sub-gastrickej žľazy. Zavedenie citrátov a oxalátov vedie k zníženiu aktivity enzýmu.

Stanovenie celkovej aktivity laktátdehydrogenázy

Laktátdehydrogenáza (L-laktát; NAD-oxidoreduktáza, EC 1.1.1.27) je glykolytický (cytosolický zinok-obsahujúci) enzým (molekulová hmotnosť 135 000 D), ktorý reverzibilne katalyzuje oxidáciu L-laktátu na kyselinu pyrohroznovú. Nepostrádateľným účastníkom tejto reakcie je oxidovaný nikotín adenín dinukleotid, ktorý sa používa ako kofaktor enzýmu, ktorý hrá úlohu akceptora vodíka.

Reakcia katalyzovaná laktátdehydrogenázou môže byť znázornená nasledujúcim spôsobom:

SNSNONSOO "+ OVER + Laktát dehydrogenáza SNSSOSOO '+ OVER • H + H +

Enzým je široko distribuovaný u ľudí. Podľa stupňa poklesu aktivity enzýmu môžu byť orgány a tkanivá usporiadané v nasledujúcom poradí: obličky, srdce, kostrové svaly, pankreas, slezina, pečeň, pľúca, krvné sérum. V posledne uvedenom sa zistilo, že existuje niekoľko rôznych proteínov (izoenzýmov), ktoré majú katalytické vlastnosti tohto enzýmu. Zmeny v štruktúre proteínovej časti izoenzýmov určujú ich rôzne fyzikálno-chemické vlastnosti (najmä odlišnú elektroforetickú mobilitu v agare, škrobe, polyakrylamide a ďalších géloch).

V plazme (sére) krvi bolo identifikovaných päť laktátových dehydrogeazových izoenzýmov - LDG1, LDG2, LDGz, LDG4, LDG5 - ktoré sú umiestnené v géli v klesajúcom poradí podľa ich elektroforetickej mobility.

Každý z izoenzýmov je tetramér tvorený podjednotkami H a M. Bolo zistené, že frakcia LDH1 je odvodená hlavne z tkaniva srdca, LDH5 - z pečene. LDH v cytoplazme buniek a séra predstavuje 5 izoenzýmov.

Podjednotka M sa nachádza hlavne v tkanivách s anaeróbnym metabolizmom, zatiaľ čo podjednotka H je prítomná v tkanivách s prevahou aeróbnych procesov. Metóda elektroforézy na nosičoch pomáha rozdeliť všetkých 5 LDH izoenzýmov, ktoré predstavujú nasledujúce percento v krvnom sére zdravých ľudí: LDH; (14–26%), LDH ^ (29–39%), LDH (20–26%), LDH4 (8–16%), LDH (6–16%) - V.N. Titov et al. (1988).

Laktát dehydrogenáza je obsiahnutá nielen v plazme, ale aj vo významných množstvách v červených krvinkách, takže sérum použité na analýzu musí byť čerstvé bez hemolýzy.

Metódy na stanovenie celkovej aktivity LDH sú rozdelené do dvoch hlavných skupín: 1) kinetická, založená na Warburovom optickom teste (optický efekt spojený s konverziou NAD na NAD • N a naopak) a 2) metódy, ktoré určujú množstvo vytvoreného produktu alebo spotrebovaného substrátu po stanovenej inkubačnej dobe (metódy koncového bodu).

32 Kolorimetrická dinitrofenylhydrazínová metóda na stanovenie aktivity laktátdehydrogenázy v krvnom sére (podľa Sevela a Tovarka)

Princíp metódy. L-laktát v alkalickom médiu v prítomnosti séra LDH a pridaný NAD sa oxiduje na pyruvát. Podľa stupňa jeho tvorby a podľa aktivity enzýmu.

činidlá

1. 0,45 mol / l roztok kyseliny mliečnej. V odmernej banke s objemom 100 ml pridajte 5 ml kyseliny mliečnej v koncentrácii 800 g / l a 10 ml kyseliny mliečnej v koncentrácii 400 g / l a neutralizujte 2N roztokom hydroxidu sodného na slabo alkalickú reakciu s pH 7,5 (pri použití fenolftaleínu by sa mal vytvoriť slabý roztok). ružovej farby). Objemy sa privedú na značku destilovanou vodou.

2. 0,03 mol / l roztok pyrofosforečnanu sodného, ​​pH 8,8. V odmernej banke s objemom 500 ml sa pridá 6,69 g Na₂ P₂O₅ • N₂Približne 50 ml diéty zriedenej vody, zmes sa dôkladne premieša a pH roztoku sa upraví na 8,8 1N roztokom HCl. Objem obsahu banky sa nastaví na značku destilovanou vodou. Ak je činidlo uchovávané v chladničke, je stabilné jeden mesiac.

3. Riešenie NAD. 3 mg NAD (chemicky čistý) sa rozpustí v 1 ml destilovanej vody (rýchlosťou 0,6 mg na vzorku). Pri skladovaní v chladničke je činidlo stabilné 4 týždne.

4. Roztok 2,4-dinitrofenylhydrazínu. 19,8 mg 2,4-dinitrofenylhydrazínu sa rozpustí v malom objeme 1N roztoku kyseliny chlorovodíkovej zahrievaním zmesi vo vodnom kúpeli. Po ochladení sa objem upraví na 1 ml 1N kyselinou chlorovodíkovou. Nasledujúci deň sa činidlo filtruje. Roztok je uložený v miske z tmavého skla, je použiteľný jeden rok.

5. 0,4 n roztok hydroxidu sodného.

6. 1N roztok kyseliny chlorovodíkovej.

7. Štandardný roztok sodnej kyseliny pyrohroznovej. 11 mg kryštalickej kyseliny pyrohroznovej sa rozpustí v malom množstve destilovanej vody, prenesie sa do 100 ml odmernej banky a objem roztoku sa doplní destilovanou vodou po značku. 1 ml roztoku obsahuje 110 μg pyruvátu sodného, ​​čo zodpovedá 88 μg kyseliny pyrohroznovej. Pracovný štandardný roztok sa pripraví zriedením hlavných 10-krát destilovanou vodou. V 1 ml pracovného roztoku 8,8 μg kyseliny pyrohroznovej.

Priebeh odhodlania. 0,1 ml séra zriedeného v pomere 1: 2 sa zmieša s 0,3 ml roztoku NAD a zahrieva sa 5 minút pri teplote 37 ° C. Potom sa 0,8 ml zahrievacieho roztoku kyseliny fosforečnej a 0,2 ml roztoku kyseliny mliečnej v kyseline, predtým zahriateho na teplotu miestnosti. 37 ° C. Zmes sa inkubuje pri 37 ° C počas 15 minút Po inkubácii sa vzorka naplní 0,5 ml 2,4-dinitofenylhydrazínu a udržuje sa pri teplote miestnosti 20 minút. Potom pridajte 5 ml roztoku hydroxidu sodného, ​​premiešajte obsah skúmavky a po 10 minútach

Absorpcia sa meria v rozsahu vlnových dĺžok 500 - 560 nm, napríklad pri PEC so zeleným svetelným filtrom v kyvete s hrúbkou vrstvy 10 mm. Zaznamená sa optická hustota vzorky s prihliadnutím na kontrolu absorpcie.

Kontrolná vzorka sa umiestni rovnakým spôsobom ako experimentálne, ale po inkubácii zmesi sa pridá 1: 2 sérum. Vypočítajte aktivitu enzýmu podľa kalibračného grafu. Aktivita laktátdehydrogenázy je vyjadrená v mmol kyseliny pyrohroznovej, ktorá je vytvorená inkubáciou 1 1 séra počas 1 hodiny pri 37 ° C.

Ak chcete získať údaje na vytvorenie kalibračného grafu, musíte vykonať nasledujúce kroky. Z pracovného štandardného roztoku kyseliny pyrohroznovej sa pripraví séria riedení (tabuľka 2). Potom sa do skúmaviek naleje 0,5 ml roztoku 2,4-dinitrofenylhydrazínu. Ďalej spracujte štandardné vzorky rovnakým spôsobom ako skúsení.

Pri umiestňovaní kontrolnej vzorky pridajte do skúmavky 0,6 ml destilovanej vody, 0,8 ml roztoku pyrofosfátu a 0,5 ml roztoku 2,4-dinitrofenylhydrazínu. Potom sa vzorka ošetrí podobne.

Na zistenie indikátorov aktivity laktátdehydrogenázy v rozmere „mmol kyseliny pyrohroznovej na 1 liter séra za 1 hodinu inkubácie pri 37 ° C“ sa počet μmol kyseliny pyrohroznovej v štandardnej vzorke vynásobí faktorom 120 alebo množstvom μg kyseliny pyrohroznovej - 1,41.

Na vyjadrenie aktivity enzýmu v jednotkách novej dimenzie môžete použiť iný vzorec:

Aktivita laktátdehydrogenázy v mmol / (h • l) = C • 120: 88,

kde C je množstvo μg kyseliny pyrohroznovej vo vzorke, 120 je prepočítavacím faktorom μg kyseliny pyrohroznovej na mg, 88 je faktor pre konverziu ukazovateľov z mg na mmol.

Pri konštrukcii kalibračného grafu na osi x sú hodnoty aktivity enzýmu vyjadrené, vyjadrené v rozmeroch, mmol DCH • l) a sú uvedené v poslednom stĺpci tabuľky 33. Rovný vzťah medzi koncentráciou kyseliny pyrohroznovej a optickou hustotou je od 0 do 10 mmol / (h • l).

Klinická a diagnostická hodnota stanovenia aktivity amylázy

Amyláza je enzým, ktorý rozkladá škrob a glykogén. pankreas a slinné žľazy sú najbohatší. Obsah amylázy v sére je spojený s príjmom potravy: počas dňa je aktivita vyššia ako v noci.

Aktivita amylázy v sére sa zvyšuje (hyperamylasémia) s:

Akútna pankreatitída (10-30-krát, ktorá sa normalizuje počas 6-7 dní, ak aktivita pretrváva viac ako 5 dní, znamená to vývoj chronického procesu);

Exacerbácia chronickej pankreatitídy;

Parotitída (zápal slinných žliaz);

Môže to byť spôsobené alkoholom, adrenalínom, drogami.

Pokles aktivity amylázy v sére (hypoamylasémia) sa pozoruje, keď: t

Ochorenia pečene (hepatitída, obštrukčná žltačka, cirhóza);

Zvýšená aktivita v moči (hyperamláza) sa pozoruje, keď: t

Akútna pankreatitída (má väčšiu diagnostickú hodnotu ako definícia v sére, pretože trvá dlhšie ako 7 dní);

Pokles aktivity enzýmu v moči (hypoamyláza) sa pozoruje, keď:

Odpovedzte na otázky:

Pomenujte miesto lokalizácie, optimálne pH a biologickú hodnotu amylázy.

Napíšte reakciu, ktorú katalyzuje amyláza.

Aká trieda enzýmov amylázy?

Aké sú hlavné ochorenia charakterizované zvýšenou aktivitou amylázy. Vysvetlite dôvod.

* Povedzte nám o príčinách, typoch, laboratórnej diagnostike a prevencii pankreatitídy.

3.8. Praktická práca "Stanovenie aktivity aminotransferáz v sére".

Ciele praktickej práce:

študovať klinickú a diagnostickú hodnotu stanovenia sérových aminotransferáz;

naučiť sa určovať aktivitu aminotransferáz v sére.

Úlohy pre nezávislú prácu:

V zápisníku napíšte princíp a metodiku praktickej práce.

Vybavte pracovisko pre praktickú prácu.

Robte praktickú prácu.

Vykonajte potrebné výpočty.

Vyplňte formulár analýzy. Hodnotiť výsledky.

Urobte záver o práci a výkresoch.

Odpovedzte na ďalšie otázky.

V dôsledku transaminácie, ku ktorej dochádza pri pôsobení AsAT a AlAT, vznikajú kyseliny oxaloctové a kyseliny pyrohroznové. Keď sa pridá roztok 2,4-dinitrofenylhydrazínu, enzymatický proces sa zastaví a objavia sa hydrazóny kyseliny pyrohroznovej. V alkalickom prostredí dávajú farbenie, ktorého intenzita je úmerná množstvu vytvorenej kyseliny pyrohroznovej.

1. Referenčný roztok kyseliny pyrohroznovej - 2 mmol / l.

2. 2,4 - dinitrofenylhydrazín - 1 mmol / l.

3. Hydroxid sodný - 0,4 n..

4. Substrát AsAT / AlAT.

2. FEC, kyvety na cm.

4. Stojan na skúmavky.

5. Pipety na 1 a 5 ml.

Vykonajte štúdiu aktivity aminotransferáz v sére podľa tabuľky.

Diagnostická hodnota stanovenia aktivity amylázy v sére

U ľudí je alfa-amyláza vylučovaná pankreasom a slinnými žľazami, jej malá aktivita sa nachádza v tkanivách pečene a kostrových svalov. Molekulová hmotnosť alfa-amylázy je relatívne nízka, na rozdiel od väčšiny enzýmov sa filtruje v glomeruloch obličiek a nachádza sa v moči. Alfa-amyláza pozostáva z dvoch izoenzýmov: typu pankreasu (typ P) a slinných (typ S). U zdravých ľudí predstavuje sérum približne 70% amylolytickej aktivity v izoenzýme slinných žliaz, v moči približne rovnaké percento je izoamyláza pankreasu.

Hyperamilasemia a hyperamalazúria sa pozorujú pri mnohých ochoreniach, ale sú najvýraznejšie pri akútnej pankreatitíde, pri ktorej sa aktivita zvyšuje hlavne (až o 90% alebo viac) v dôsledku izoenzýmu pankreasu. S týmto ochorením bolo zaznamenané najvyššie množstvo amylázy v krvi a moči počas prvých 1 - 3 dní. Vírusová hepatitída a rakovina pankreasu tiež spôsobujú hyperamilazúriu pankreasu pankreatického pôvodu.

Nepankreatickou hyperamyláziou patrí poškodenie slinných žliaz, zlyhanie obličiek. Dôvody zvýšenia b-amylázy v krvi sú zhoršená sekrécia žliaz obsahujúcich b-amylázu, nedostatočnosť vylučovania amylázy z tela obličkami.

Mnohé farmakologické látky, kortikosteroidy, salicyláty, tetracyklín, furosemid, histamín spôsobujú hyperamalasémiu. Pre b-amylázu je krv charakterizovaná širokými intra- a interindividuálnymi variáciami. Najinformatívnejšia je definícia izoamylázy pankreasu.

Zmena aktivity alfa-amylázy v patológii.

Stanovenie aktivity alfa-amylázy získava klinickú a diagnostickú hodnotu v diagnostike a monitorovaní ochorení pankreasu, tráviaceho systému, poškodenia brušných orgánov. V niektorých prípadoch (napríklad pri ochoreniach pankreasu) má diagnostický význam len jeden izoenzým, pankreatická alfa-amyláza; pri sledovaní ochorení zažívacieho traktu je potrebné porovnať aktivitu enzýmu v sére (sekrečná aktivita a dodatočná absorpcia z brušnej dutiny) a moč (často je stupeň amylazúrie stabilnejší a trvácnejší ako amylazémia).

Hodnoty zvýšenej aktivity alfa-amylázy sa pozorovali pri:

Zápalové ochorenia pankreasu (akútne, opuchnuté, chronické, reaktívna pankreatitída). Hyper-amylasémia je zvyčajne akútna (10-40-krát vyššia), ale často krátko trvajúca, hyperamyláza je tiež významná, ale hladina alfa-amylázy v moči sa znižuje oveľa pomalšie ako v krvnej plazme (sére). Táto vlastnosť je vhodná na použitie pri „neskorom“ diagnostickom vyšetrení pacienta s klinickými príznakmi pankreatitídy, avšak na monitorovanie priebehu procesu, aktivita enzýmu sa zvyčajne meria v oboch biologických tekutinách. Je potrebné poznamenať, že ťažké formy lézií pankreasu s hrozbou nekrózy tkaniva, ako aj pankreatitídy, sprevádzané závažnými poruchami metabolizmu lipidov, môžu byť sprevádzané skutočným alebo falošným (v dôsledku inhibície amylázy triacylglyceridmi) znížením aktivity enzýmu. Preto ak je podozrenie na akúkoľvek formu pankreatitídy, je diagnosticky dôležité nielen určiť aktivitu alfa-amylázy v moči a sére, ale aj vypočítať klírens amylazo-kreatinínu podľa vzorca:

Pri akútnej pankreatitíde táto vypočítaná hodnota presahuje 6%. Výpočet klírensu vám neumožňuje vykonať korekciu objemu a času odberu moču a výsledok je menej závislý od použitých metód stanovenia.

Choroby brušnej dutiny s podobnými príznakmi akútnej pankreatitídy: akútna apendicitída, peritonitída, perforovaný žalúdočný vred a dvanástnikový vred. Aktivita alfa-amylázy sa zvýši asi o 3-5, zriedka 10-krát, hlavnou príčinou hyperémie je to, že nie je toľko zvýšené vylučovanie enzýmu, ako jeho sekundárna absorpcia z brušných orgánov do krvi. Na rozlíšenie diagnózy sa vykonáva stanovenie alfa-amylázy a kreatinínu v moči a výpočet klírensu kreatinínu pomocou vyššie uvedeného vzorca. Pri konštantnej hodnote klírensu od 1 do 4% by mali byť podozrivé ochorenia brušných orgánov, ktoré sa maskujú ako akútna pankreatitída.

Z rovnakého dôvodu sa aktivita alfa-amylázy významne zvyšuje s perforáciou pažeráka, gastritídou, akútnou intestinálnou obštrukciou, ischémiou a infarktom tenkého čreva, ruptúrou tubusu, salpingitídou, aneuryzmou aorty.

Pri ochoreniach vnútorných orgánov, ktoré nie sú priamo spojené s tráviacim systémom, je možné mierne zvýšenie aktivity celkovej alfa-amylázy a / alebo jej izoenzýmov. Takéto ochorenia zahŕňajú: cholecystitídu, cholelitiázu, poškodenie parenchýmu obličiek a zápalové ochorenia tohto orgánu, zlyhanie obličiek, prostatitis, diabetickú ketoacidózu, metastázy malígnych nádorov v tkanivách a orgánoch (najmä v pľúcach, pankrease, priečnom hrubom čreve). Ak je podozrenie na patologické stavy opísané vyššie, vykoná sa komparatívna analýza celkovej a pankreatickej alfa-amylázy, pretože ochorenia izoenzýmu sa zväčšujú u opísaných ochorení (onkologické poškodenie pankreasu a priečneho hrubého čreva zvyšuje aktivitu oboch izoenzýmov P a S, čo umožňuje rozlíšiť zápalových ochorení rovnakých orgánov).

Hyperamalazémia nepankreatického pôvodu sa vyskytuje aj pri ochoreniach slinných žliaz a niektorých patologických stavoch mozgu. V tomto prípade nastáva zvýšenie celkovej aktivity alfa-amylázy aj v dôsledku zvýšenia aktivity izoenzýmu slinných žliaz a na rozlíšenie diagnózy by sa malo vykonať paralelné meranie celkovej a pankreatickej alfa-amylázy (s normálnou aktivitou P-amylázy, možno predpokladať vyššie uvedenú patológiu).

Komparatívna analýza aktivity alfa-amylázy v moči a sére je tiež hodnotným diagnostickým parametrom pri hodnotení renálnej patológie. Keď je renálna filtrácia narušená (pri nefrotickom syndróme, glomerulonefritíde atď.), Aktivita alfa-amylázy v moči je výrazne znížená, zatiaľ čo v krvi je zaznamenaný mierny alebo významný hyperamlazemia, preto je koeficient amylázy v sére / amyláza v moči jedným z hlavných diagnostických parametrov s touto patológiou.

Pooperačné stavy (systémová zápalová odpoveď na operáciu, vývoj ARDS atď.) Môžu tiež spôsobiť miernu hyperamyláziu.

Zníženie aktivity alfa-amylázy zvyčajne sprevádza zníženie funkčnej aktivity pankreasu, spôsobené poškodením parenchýmu orgánu a / alebo zhoršenou exokrinnou reguláciou a najčastejšie sa vyskytuje, keď:

Nekrotické zmeny pankreasu spojené s hemoragickou pankreatitídou a úplnou nekrózou pankreasu.

S ochorením pečene (hepatitída, cirhóza). Malígne nádory, najmä v metastázach pečene.

Závažná endokrinná nerovnováha: hypotyreóza, diabetes mellitus, hyperlipémia (najmä s nadbytkom triacylglyceridov, v dôsledku inhibície centra aktívneho enzýmu), so všeobecnou nutričnou poruchou, kachexiou a toxikózou tehotných žien.

V niektorých prípadoch, s patológiami opísanými vyššie, sérová aktivita alfa-amylázy nemusí klesať, ale zostáva nezmenená.

Hlavné vzťahy v diferenciálnej diagnostike patológií s podobnými príznakmi.

Najbežnejšie pomery sú:

Celková alfa-amyláza / pankreatická zložka. Používa sa v diferenciálnej diagnostike zápalových a malígnych procesov v brušných orgánoch a niektorých ďalších tkanivách. V zápalových procesoch, ktoré neovplyvňujú pankreas, je hlavným zdrojom aktivity celkovej alfa-amylázy slinný enzým, preto pomer „Celková amyláza / izoforma pankreasu“> 1. Pri malígnom poškodení brušných orgánov je podiel oboch izoenzýmov približne rovnaký a tento koeficient je približne rovný 1., 8-2,4. Pri zapájaní pankreasu do zápalového procesu alebo v prítomnosti nádorových metastáz v ňom nepresahuje pomer aktivity celkovej a pankreatickej amylázy 1,5.

Celková alfa-amyláza / kreatinín v moči a sére. Vypočítaný klírens sa používa (vzorec je uvedený v odseku 3), umožňuje rozlíšenie zápalového procesu v pankrease (pomer presahuje 6%) a abdominálnych orgánov (1-4%).

Celková alfa-amyláza v sére / alfa-amyláza v moči. Používa sa pri hodnotení funkčnej aktivity renálneho filtra. Pri nefrotickom syndróme a glomerulonefritíde je koeficient vyšší ako 2-2,5.

Celkové sérové ​​triglyceridy alfa-amylázy / séra. Pomer je „inverzný“, pretože nadbytok triacylglyceridov môže inhibovať aktivitu alfa-amylázy. Umožňuje rozlíšiť patologické zníženie produkcie enzýmu a interferenciu s hyperipmiou.

Celková sérová alfa-amyláza / pankreatická lipáza. Biologický a diagnostický význam koeficientu je podobný ako v predchádzajúcom pomere, pretože prítomnosť voľných triacylglyceridov v sére priamo súvisí s aktivitou pankreatickej lipázy. Podiel je priamy.

Zmeny aktivity alfa-amylázy u zdravých ľudí. Interferencie s liekmi.

Aktivita alfa-amylázy v krvnej plazme zdravých ľudí v podstate závisí od povahy diéty a potravín, ktoré prevládajú v strave. Okrem toho tento parameter silne závisí od intenzity metabolických procesov u konkrétneho jedinca, ako aj od mozgovej aktivity subjektu. Preto sa aktivita enzýmu v rovnakom jedincovi v rôznych časoch (dokonca v priebehu toho istého dňa) môže meniť v rozsahu 25-50% v oboch smeroch.

Hyper-amylasémia u zdravých ľudí môže byť spôsobená emocionálnym stavom (stres, zvýšená duševná aktivita), pitím (dokonca raz) alkoholu a je tiež spojená so stravou bohatou na bielkoviny a ochudobnenou o sacharidy a cukry. Hypoamylázia sa vyskytuje so zvýšeným využívaním glukózy, s pôstom, aktívnym cvičením, ako aj s ľuďmi s hyperlipidémiou, dokonca aj bez jej klinických prejavov.

V tehotenstve do 19 týždňov je aktivita alfa-amylázy znížená v porovnaní s normou, čo sa týka až 33-34 týždňov tehotenstva, zvyšuje sa aktivita a 37-40 týždňov sa stabilizuje na úrovni o 10-20% vyššej ako je aktivita enzýmu u zdravých negravidných žien.,

Aktivita alfa-amylázy a jej izoenzýmu pankreasu je tiež významne ovplyvnená použitím mnohých bežných liekov, ktoré používajú prakticky zdraví ľudia v prípade prechodných infekčných a zápalových ochorení - napríklad tetracyklínových antibiotík, furosemidu, kortikosteroidných protizápalových liekov, salicylátov.

Významný vplyv na aktivitu alfa-amylázy majú aj lieky, ktoré vedú k zníženiu Oddiho zvierača vrátane hormónov (adrenalín, histamín, sekretín), omamných látok (morfín, pantopon, ópium, kodeín) a iných liekov, ktoré zvyšujú vylučovanie enzýmu a potláčajú odtok sekrécie z pankreasu.

Na základe biofile.ru

Princíp metódy: Maltotrioside spojený s chromogénom 2-chlór-p-nitrofenolom sa používa ako substrát pre a-amylázu. Pri pôsobení a-amylázy sa substrát hydrolyzuje, aby sa uvoľnil farebný 2-chlór-p-nitrofenol, maltotrióza a glukóza. Reakcia prebieha rýchlo a nevyžaduje prítomnosť koenzýmov v reakčnej zmesi. Rýchlosť hydrolýzy substrátu je priamo úmerná aktivite a-amylázy vo vzorke a meria sa spektrofotometricky pri vlnovej dĺžke 405 nm.

Substrát-CNF ————> CNF + glukóza + maltotrióza

Linearita metódy: do 1500 U / l.

a-Amyláza v nehemolyzovanom sére zostáva stabilná pri teplote miestnosti (18-25 ° C) počas 7 dní, pri skladovacej teplote 2 - 8 ° C počas 2 mesiacov.

1) Spektrofotometer s kyvetou s riadenou teplotou, vlnová dĺžka 405 nm, dĺžka optickej dráhy 1 cm; reakčná teplota 37 ° C;

3) automatické pipety pre 25 μl a 1000 μl;

Slinná tekutina sa môže tiež použiť ako zdroj enzýmu (sliny sa predtým zriedia destilovanou vodou 100-krát), ale rozsah normy sa veľmi líši.

6) Pracovné činidlo (substrát - 1,8 mmol / lv MES-pufri (pH 6,0 ± 0,1)).

Pracovné činidlo je vhodné na použitie, ak jeho optická hustota nie je vyššia ako 0,6 jednotiek optickej hustoty. pri vlnovej dĺžke 405 nm a neexistuje zakalenie.

Pred analýzou by sa reagencie mali zohriať na teplotu merania (37 ° C).

Obsah skúmavky zamiešajte a zapnite stopky. Zmerajte optickú hustotu vzorky proti destilovanej vode v dĺžke 405 nm presne v 1 minúte. Meranie opakujte 3 krát s intervalom 1 min. Vypočítajte zmenu optickej hustoty za minútu a potom vypočítajte priemerné meranie optickej hustoty za minútu (Dop / min).

Výpočet aktivity faktora a-amylázy vykonaného podľa vzorca: t

kde Dop / min je priemerná zmena optickej hustoty za minútu;

1,025 - celkový objem roztoku v kyvete;

1000 je konverzný faktor ml na l;

12,9 - milimolárny absorpčný koeficient 2-chlór-p-nitrofenolu;

0,025 je objem séra v ml;

1,0 je dĺžka optickej dráhy.

Pri akýchkoľvek zmenách uvedených parametrov by sa mal prepočítavať faktor. Ak aktivita a-amylázy presiahne 1500 U / l (bod mimo linearity kalibračného grafu), analyzované sérum by sa malo zriediť 1: 1 fyziologickým roztokom a meranie by sa malo zopakovať a výsledok výpočtu by sa mal vynásobiť 2.

Klinická a diagnostická hodnota: a-amyláza je endohydroláza a v ľudskom tele je zastúpená niekoľkými izoenzýmami: enzým je vylučovaný slinnými žľazami (typ S), pankreasom (typ P); malá aktivita enzýmu sa nachádza v pečeni, kostrovom svalstve, slznej tekutine, sekrécii prsných žliaz a rôznych nádoroch.

Aktivita a-amylázy v sére sa významne zvyšuje v dôsledku P-izoenzýmu pri rôznych ochoreniach pankreasu (pankreatitída, absces, trauma, rakovina).

S poraneniami slinných žliaz (rakovina slinných žliaz, endemická parotitída, makroamylazémia) sa zvyšuje aj aktivita a-amylázy v sére, ale na úkor S-izoenzýmu.

Obidva izoenzýmy a-amylázy majú malú molekulovú hmotnosť (45 000), takže sa filtrujú v obličkách a vylučujú sa močom. Zvýšenie aktivity amylázy v moči (diastáza) pri akútnej pankreatitíde nastáva o 6 až 10 hodín neskôr ako v krvnom sére.

Na základe biohimist.ru

Princíp metódy. Alfa-amyláza katalyzuje hydrolýzu nerozpustného farebného škrobového substrátu za vzniku modrého vo vode rozpustného farbiva. Množstvo uvoľneného farbiva je úmerné aktivite enzýmu.

Priebeh odhodlania. Na stanovenie aktivity alfa-amylázy v sére alebo moči sa pripravia paralelné experimentálne a kontrolné vzorky a analyzujú sa v nasledujúcom poradí:

Vzorky sa zmiešajú, nechajú sa stáť 15 minút, odstredia sa pri 3000 ot / min počas 5 minút. Potom zmerajte optickú hustotu experimentálnej vzorky proti kontrole na FEC pri vlnovej dĺžke 590 nm v kyvetách s hrúbkou vrstvy 5,0 mm.

Aktivita enzýmu sa nachádza v kalibračnom pláne.

Klinická a diagnostická hodnota stanovenia aktivity alfa-amylázy v sére a v moči: u ľudí je alfa-amyláza vylučovaná pankreasom a slinnými žľazami, jej malá aktivita sa nachádza v pečeňovom tkanive a kostrových svaloch. Molekulová hmotnosť enzýmu je relatívne nízka ("48 000"), takže sa filtruje v glomeruloch obličiek a je obsiahnutá v moči.

U zdravých ľudí je aktivita enzýmov v sére od 140 do 350 U / l, v moči od 1000 do 2000 U / l. Aktivita amylázy sa zvyšuje najmä pri ochoreniach pankreasu (pri akútnej pankreatitíde). Choroby slinných žliaz a chronické ochorenia obličiek vedú k zvýšeniu aktivity alfa-amylázy v sére.

Pracovné číslo 5. Účinok adrenalínu na glukózu v krvi.

Priebeh práce. U králika, z okrajovej žily ucha alebo u potkana z kaudálnej žily sa odoberie 0,1 ml krvi a glukóza v krvi sa stanoví o-toluidínovou metódou.

Potom má zviera na boku ostrihané vlasy, trenie pokožky alkoholom a 0,1% roztok adrenalínu sa podáva subkutánne rýchlosťou 0,1 ml na 1 kg hmotnosti a po 30 minútach sa opäť meria hladina glukózy v krvi.

Práca číslo 6. Účinok inzulínu na krvnú glukózu.

Priebeh práce. Z iného králika z okrajovej žily ucha alebo z potkana z kaudálnej žily odoberte 0,1 ml krvi a stanovte obsah glukózy v krvi.

U zvierat odrežte kožu na boku, ošetrite alkoholom a aplikujte subkutánne inzulín v množstve 1,5 medzinárodných jednotiek na kg hmotnosti. O hodinu neskôr znovu stanovte hladinu glukózy v krvi. Zvieratá sa zavedú subkutánne 5% roztokom glukózy, aby sa zabránilo inzulínovému šoku: králik 10 ml, potkan - 1 ml.

Výsledky 3. a 4. práce pracujú na tabuľke a vyvodzujú závery.

Na základe materiálov www.ronl.ru

α - Amyláza (diastáza, 1,4 - a - D - glukánová hydroláza, EC 3.2.1.1.) katalyzuje hydrolýzu a - 1,4 - glukozidových väzieb škrobu, glykogénu a ich príbuzných polysacharidov na maltózu, dextríny a iné polyméry. Molekulová hmotnosť enzýmu je asi 48 000 D. Molekula obsahuje atóm vápnika, ktorý nielenže aktivuje enzým, ale ho tiež chráni pred účinkom proteáz a aktivita amylázy sa zvyšuje s vplyvom iónov chlóru. V krvi predstavujú dva izoenzýmy: pankreatický - P-typ a slinný - S-typ, z ktorých každý je rozdelený do niekoľkých frakcií. Izoenzým S-typu je vo všeobecnosti 45 - 70% (v priemere 57%), zvyšok je v type P. Oba izoenzýmy majú takmer identické katalytické a imunologické vlastnosti, mierne sa líšia v elektroforetickej mobilite, ale sú dobre separované gélovou filtráciou na DEAE - Sephadex. K dispozícii je tiež makroamyláza, ktorá sa nevylučuje obličkami, ale môže sa nájsť v normálnom krvnom sére (približne 1% zdravých ľudí) a patológii (2,5%).

Vysoká aktivita amylázy sa pozoruje v príušnej a pankrease. Jeho aktivita, aj keď oveľa nižšia, sa však nachádza v tenkom a hrubom čreve, kostrových svaloch, pečeni, obličkách, pľúcach, vajcovodoch, tukovom tkanive. V krvi je enzým spojený s plazmatickými proteínmi aj s tvorenými prvkami. Aktivita enzýmu je rovnaká pre mužov a ženy a nezávisí od povahy prijatej potravy a dennej doby.

Existujúce metódy skúmania aktivity a-amylázy v biologických tekutinách sú rozdelené do dvoch veľkých skupín:

1. Sacharizujúce (reduktometrické) založené na výskume cukrov vytvorených zo škrobu redukčným účinkom glukózy a maltózy.

2. Amyloclastic, založený na stanovení zvyšku nerozštiepeného škrobu: t

• podľa stupňa intenzity jeho reakcie s jódom. Tieto metódy sú citlivejšie a špecifické, ale ich presnosť do značnej miery závisí od kvality škrobu a optimalizácie podmienok stanovenia.
• viskozitnú suspenziu škrobu, nemajú vysokú presnosť a nepoužívajú sa teraz.

3. Metódy využívajúce chromogénne substráty –– sú založené na použití komplexov substrát - farbivo, ktoré sa pôsobením a - amylázy rozpadajú za vzniku vo vode rozpustného farbiva.

4. Metódy založené na spojených enzymatických reakciách: t

Škrob + H₂O Maltose + Maltotriose + Dextrín

Maltose + N₂Asi 2 glukózy

Glukóza + ATP glukóza - 6 - F + ATP

Glukóza-6-F + NADF Glukonát-6-F + NADFN

Aktivita enzýmu je určená rýchlosťou akumulácie NADPH.

Dve amyloclastické metódy boli schválené ako jednotné: Karavey (s rezistentným škrobovým substrátom) a Smith-Rohe.

α-Amyláza katalyzuje hydrolýzu nerozpustného farebného škrobového substrátu za vzniku modrého vo vode rozpustného farbiva. Množstvo uvoľneného farbiva je úmerné katalytickej aktivite enzýmu.